凝胶制备

1、将Tumor forming Gel置于37℃水浴锅至少10分钟以便充分溶解。

2、用37℃预热的无血清DMEM培养基稀释Dilution buffer至0.25X 或0.5X (1.25 mL Dilution buffer (1X) + 3.75 mL 无血清DMEM培养基) (2.5 mL Dilution buffer (1X) + 2.5 mL 无血清DMEM培养基)

3、用Dilution buffer将癌细胞密度调整至4x10⁶cells/mL。

4、将细胞悬液与Tumor forming Gel (1X)按照1:1比例混匀，细胞终浓度为2x106 cells/mL。

5、用23-26号针头（推荐24号针头）和1 ml注射器，在室温下提取0.2-0.3 mL的凝胶混合物。将吸取的凝胶混合物室温下放置10分钟。

6、室温下转移注射器。

小鼠的凝胶注射

1、室温下，将凝胶混合物皮下注入小鼠体内。

2、每周测量肿瘤大小，4-5周后切除肿瘤组织进行检测。

注意事项

1）Tumor forming Gel和Dilution Buffer使用前应在37℃下预热。

2）0.5X Dilution Buffer可增加注射后的凝胶硬度和皮下肿胀，但可能会影响肿瘤的生长速度。

3）如果吸取凝胶时针头出现堵塞，请取下针头，改用注射器。事先准备好注射器，以避免过度凝胶和针头堵塞。

4）推荐使用5-6周龄的雌性小鼠进行实验。

5）缓慢注入，避免凝胶阻力高导致针脱位。