| 背景描述 | FectinMore™ 是经优化设计的针对贴壁 /悬浮细胞的非脂质体阳离子聚合物转染试剂，用于 DNA转染。 FectinMore™ 可与细胞表面的蛋白多糖结合，通过细胞吞饮作用进入细胞，形成的转染试剂-目标核酸 复合体在胞质中释放。FectinMore™ 适合贴壁细胞转染，也能转染一些难转细胞，操作简单，高效低毒。 |
| 产品应用 | DNA Transfection |
| 储存 | -20℃，有效期两年 |
| 运输 | 蓝冰 |
DNA质粒转染细胞实验FectinMore™推荐用量：
| 培养板/皿 | 生长面积（cm^2/孔） | 每孔总体积 | DNA量/无血清培养基 | FectinMore™量/无血清培养基 |
|---|---|---|---|---|
| 96孔板 | 0.3 | 100 μL | 250 ng/10 μL | 0.75 μL/10 μL |
| 24孔板 | 2 | 500 μL | 500 ng/25 μL | 1.5 μL/25 μL |
| 12孔板 | 4 | 700 μL | 750 ng/35 μL | 2.25 μL/35 μL |
| 6孔板 | 9.5 | 1mL | 1 μg/50 μL | 3 μL/50 μL |
| 60mm培养皿 | 20 | 3mL | 2.5 μg/150 μL | 7.5 μL/150 μL |
| 100mm培养皿 | 60 | 6 mL | 5 μg/300 μL | 15 μL/300 μL |
操作步骤 (依据上表以24孔板为例 ，DNA转染)
1. 准备待转染细胞：按照贴壁细胞5×10^4/孔的密度接种于24孔板中，37℃培养过夜。
2. 转染前30分钟，将待转细胞更换新鲜无血清或有血清培养基。更换的培养基需预先平衡至室温或37℃。
3. 准备FectinMore™转染试剂/DNA 复合物：将0.5 μg DNA 溶于25 μL无血清培养基中混匀 ；将1.5 μL FectinMore™加入另外25 μL无血清培养基中混匀 。室温5分钟后，将后者加入前者中混匀，得到的50μL复合物室温孵育15-20分钟。
注意事项：
1) DNA纯度建议A260/A280=1.8-1.9 。
2) 此处使用的培养基推荐使用Opti-MEM™I Reduced-Serum Medium 或 OptiPRO™ SFM培 养 基 。
3) FectinMore™/ DNA复合物混匀操作需充分，勿涡旋震荡 。
4. 转染：将上述 FectinMore™/DNA 复合物加入每孔细胞(无血清或有血清细胞培养基450 μL)，复合物占总体积的1/10，轻柔摇匀。37℃孵育 24 -48 小时。如采用无血清培养基，必要时，转染 6 小时后可添加新鲜有血清培养基。
· 采用转染试剂转染细胞( 转染试剂：DNA=3：1) ，两天后检测蛋白表达情况 。
 |
Proteins expression checked by western blot in specific primary antibody followed by secondary antibody (anti-Mouse IgG(H+L)- HRP). |
 |
Proteins expression checked by FACS in specific primary antibody followed by secondary antibody (anti - Mouse IgG(H +L)- FAM). |
 |
Proteins expression checked by immunofluorescence (IFA) in specific primary antibody followed by secondary antibody (anti - Mouse IgG -iFluor 594). |
扫码关注公众号
