Q：细胞因子（重组蛋白）如何溶解和分装储存？

A：乔默生物细胞因子（重组蛋白）均为冻干粉，客户收到产品后我们承诺-20℃或-80℃可保存一年。(当然如果保存方式得当，是可以保存数年的。)

收到产品后，强烈建议在开盖前先进行离心，以便使可能因运输脱落粘附在管盖或管壁上的蛋白聚集于管底。

1．离心：低速离心 (3000-3500 rpm) 5 分钟。

2．溶解（请按照以下两步进行正确充分的溶解）：

第一步：用说明书上指定溶液进行溶解，溶解浓度控制在 0.1-1.0 mg/ml。溶解时不可涡旋震荡，剧烈震荡会导致其化学键的断裂，从而造成蛋白失活。为保证实现细胞因子或重组蛋白的完全溶解，可在加入适当的溶液后轻摇或用移液枪的枪头轻吹几下，并室温静置20min左右，待细胞因子完全溶解后使用。

第二步：稀释：冻干粉蛋白溶解后可根据自己的后续实验需要进一步稀释，稀释可用培养基或PBS等溶液，其中需务必含有载体蛋白如BSA、FBS、HSA或海藻糖等。

3．分装和储存：分装时每管中工作液的体积最好是一次实验的用量，分装的体积最好大于20ul，避免吸附带来的蛋白损失。避免反复冻融引起蛋白活性的降低。任何一次冻融循环都会引起蛋白活性的降低。

*蛋白初步溶解后在4℃可保存1周；如需长期保存，则需加入含载体蛋白的溶液进行进一步稀释后再分装冻存于-20℃或-80℃，可保存3-6个月。

Q：重悬后高于或低于该浓度范围可以吗？

A：不建议。过高或过低的浓度会导致细胞因子或蛋白不稳定，即很容易出现活性下降的现象。高于这个浓度范围，可能会超过该蛋白的最大溶解浓度，加入的溶液无法完全溶解蛋白，影响后续蛋白活性。此外，高于或低于该浓度范围，蛋白都可能会出现聚集，最终结果还是部分蛋白未溶解，导致蛋白活性的减弱。

Q：载体蛋白有哪些？

A：0.1%BSA，10%FBS(胎牛血清)，5%HSA(人血清白蛋白)，5%海藻糖，四者选其一。无血清实验培养时，建议选择5%海藻糖。

Q：含载体蛋白的溶液指的是什么溶液呢？水可以吗？

A：为了维持一定的pH值跟盐类浓度，避免蛋白不稳定，不建议用水，该溶液通常建议选择pH近中性、有一定缓冲能力的缓冲液，如PBS、培养基（RPMI1640, DMEM等）等。

Q:有人会在细胞因子或重组蛋白冻干粉用推荐溶液重悬后直接分装冻存于-20℃至-80℃，这样可以吗？

A：不可以。塑料管壁对多数蛋白均有很好的吸附作用，也就是说溶液中的蛋白很容易粘附在管壁。粘附后，蛋白是很难与管壁分离的。我们所熟悉的ELISA实验中包被抗体/抗原就是通过这种粘附作用包被到酶标板上的。

载体蛋白，如0.1% BSA、10% FBS、5% HSA和5%海藻糖的主要作用是封闭塑料管壁上的蛋白结合位点，使细胞因子或重组蛋白不会粘附于管壁。如果在细胞因子或重组蛋白冻干粉用推荐溶液重悬后，不用含载体蛋白的溶液进一步稀释，而是直接分装冻存，则溶液中的大部分细胞因子或重组蛋白均会粘附到管壁上，导致溶液中实际溶解的细胞因子或重组蛋白的浓度大大降低，最终表现为细胞因子或重组蛋白活性的下降。此外，载体蛋白也能维持蛋白在低温条件下的稳定，使其保持活性。

因此，在分装冻存前，一定要用含载体蛋白的溶液将重悬液进一步稀释。